quarta-feira, 17 de junho de 2009

EXPERIÊNCIA : EXTRAÇÃO DE DNA DE CÉLULAS DE CEBOLA.







INTRODUÇÃO

Existem dois tipos de ácido nucléicos: o ácido desoxirribonucléico (DNA) e o ácido ribonucléico (RNA). O DNA se localiza nos cromossomos e é capaz de se duplicar. Nele está a informação das características do indivíduo. As unidades genéticas dessas informações, os genes, são setores da molécula do DNA. A molécula de ácido nucléico resulta da união de um grande número de nucleotídeos. Cada nucleotídeo é formado por três substâncias: Uma pentose, uma base nitrogenada e um fosfato. Os pentoses podem ser a ribose (no RNA) e a desoxirribose (no DNA); as bases podem ser purínicas (adenina e guanina) ou pirimidínicas (citosinas, timina e uracila). A timina é exclusiva do DNA e a uracila, do RNA. O DNA é formado por duas cadeias de polinucleotídeos enroladas em hélice e ligadas uma á outra por pontes de hidrogênio, que se estabelecem entre as bases nitrogenadas que se defrontam. Essa ligação é específica. Se em uma cadeia há timina, a base oposta da outra cadeia deve ser a adenina. Do mesmo modo, a citosina se emparelha com a guanina. Durante a duplicação do DNA, cada filamento modela ao seu lado um novo filamento completamentar, usando nucleotídeo soltos no nucleoplasma. Por causa da obrigatoriedade A-T e C-G, esse filamento tem a mesma seqüência de bases que o antigo que ocupava a mesma posição. Formam-se, portanto, duas moléculas de DNA com a mesma seqüência de bases.
Recentemente temos assistido a inúmeros debates mundiais sobre temas polêmicos envolvendo a genética. Dentre este podemos citar: clonagem (iniciada com a ovelha Dolly), organismos transgênicos e geneoma humano. Sem dúvida, ao final do século XX, vivemos uma verdadeira revolução genética em função do desenvolvimento de técnicas que possibilitaram o isolamento e manuseio do DNA. Estas técnicas dizem respeito principalmente a tecnologia do DNA recombinante e o desenvolvimento de técnicas de ampliação de segmentos de DNA (PCR). O primeiro passo para a aplicação das técnicas que envolvem o estudo do DNA, é a obtenção desse DNA. Atualmente esse trabalho foi bastante simplificado e qualquer um de nós pode extrair DNA na nossa própria cozinha a partir de substâncias básicas. Com esta prática iremos demonstrar, através de um método simplificado e “caseiro” como podemos obter DNA para estudos. A extração de DNA de células eucariontes consta fundamentalmente de três etapas: 1) Ruptura das células para liberação dos núcleos; 2) Desmembramento da cromatina em seus componentes básicos: DNA e proteínas e 3) Separação do DNA dos demais componentes celulares.”(Texto extraído do Mobilab)”.

EQUIPE DE TRABALHO

05 grupos com 04 componentes

OBJETIVOS

Observar a formação de DNA na porção dos tubos de ensaio onde existe maior concentração de álcool.

MATERIAIS

Uma cebola (Allium cepa) grande cerca de 200g.
02 tubos de ensaio.
Faca ou ralador de cozinha.
02 béqueres de 250mL.
01 Prato.
01 pipeta de 10mL.
Detergente de louças.
01 bastão de vidro.
NaCl ou Sal de cozinha.
01 recipiente com água a 60ºC.
Álcool etílico 95% ou álcool comercial gelado (cerca de 10ºC).
01 termômetro.
Água destilada ou filtrada.
Balança.
02 filtros de papel (pode ser de café).
Papel de alumínio.
01 funil.
Espátula.
01 isopor pequeno com gelo.
02 tubos de ensaio.

PROCEDIMENTO

1) Ralar ou picar a cebola em pedaços pequenos em um prato.
2) No béquer ou copo, misturar: 10mL de detergente de louças (4 colheres de sopa) mais 3 gramas de sal de cozinha (1 colher de chá) e completar até 250mL com água destilada ou filtrada. Mexer bem com o bastão de vidro até dissolver completamente.
3) Junte-se a essa solução a cebola picada ou ralada, misture bem, e em seguida leve ao banho-maria por cerca de 15 minutos. (Pode-se usar o fogareiro ou deixar água na estufa de esterilização previamente aquecida a 60ºC).
4) Em seguida, resfrie rapidamente a mistura colocando-a no isopor com gelo por cerca de 5 minutos, mexendo-a cuidadosamente com o auxílio do bastão de vidro.
5) Coe a mistura em filtro de papel usando um béquer ou copo para coletar o filtrado. (Se usar papel de filtro, utilize um funil para filtrar a solução).
6) Transfira o líquido coado para dois tubos de ensaio, enchendo-os até a metade.
7) Adicionar ao filtrado cerca do mesmo volume de álcool 95% gelado, tendo o cuidado de escorrer cuidadosamente pela borda, de modo a formar duas fases, a superior, alcoólica e a inferior, aquosa.
8) Inverter delicadamente os tubos, vedando suas bocas, para que se formem fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.

Observação: Nesta prática será utilizado o bulbo de cebola por apresentar: a) células grandes as quais se rompem quando a célula é picada e b) Por ser solúvel em água e insolúvel no álcool, em pouco tempo é possível se observar grumos de DNA na porção dos tubos de ensaio onde existe maior concentração de álcool. Caso a quantidade de DNA observado seja pequena, pode-se adicionar mais álcool aos tubos de ensaio e/ou inverter delicadamente os tubos para que mais moléculas de DNA sejam “capturadas”. De qualquer modo, deve-se manusear delicadamente esse material para se evitar a quebra das moléculas de DNA.

QUESTÕES PARA REFLEXÃO

1) Qual a finalidade do detergente, com relação ao envoltório nuclear?
2) Um dos componentes do detergente, o dodecil (ou lauril) sulfato de sódio, desnatura as proteínas. Qual a importância deste fato na obtenção do DNA?
3) Dê sua opinião com relação ao que você sabe sobre a aplicação das técnicas de manipulação do DNA.

6 comentários:

  1. Queria responder essas questoes de reflexão, aonde encontro as respostas??

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  2. E as respostas das questões?

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  3. eu adoreii fazer esse esperimento valeuuu

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  4. o Detergente tem a função de tirar os lipídeos e as gorduras, o sal por sua vez precipita o DNA, logo fica denso e pode ser visto a olho nu, "A Molécula"...

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